一、简介与问题

聽聽亚硫酸盐琼脂培养基主要用于厌氧亚硫酸盐还原杆菌的试管计数。使用该培养基时，需要加入铁粉，培养时目标菌产生的H₂S与之反应，形成黑色的区域。由于铁粉需要使用人员单独加入，有客户反馈加入铁粉灭菌后，很多铁粉沾在试管壁上，即使用力摇晃也不能完全脱落。本文就此以对比试验的方式进行说明展示。

二、试验设置

聽聽共设三组试验，第一组为试管中先加入培养基，再加铁粉；第二组为试管中先加入培养基，上面覆盖一层液体石蜡，再加铁粉（设置该组试验，是为了验证本公司另一个需要加入铁粉的产品-疱肉培养基即用型管的情况）；第三组为试管中先加入铁粉，使铁粉尽量不要粘附在试管壁上，然后再加入培养基。上述操作全部完成后，进行高压灭菌。

三、试验结果

聽 （1）灭菌前，第一组的铁粉全部在培养基上面；第二组部分铁粉沉到试管底部，部分铁粉透过液体石蜡留在培养基上面，液体石蜡表面也粘附一些铁粉；第三组铁粉全部在试管底部（如图1）。

图1 灭菌前三组试管中铁粉的状态

（从左到右依次为第一组、第二组、第三组）

聽 （2）灭菌后，不摇晃，第一组和第二组试管壁上粘附了很多铁粉，第三组试管壁上基本没有（如图2）。

图2 灭菌后三组试管中铁粉的状态

（从左到右依次为第一组、第二组、第三组）

聽 （3）灭菌后的试管进行摇晃，前两组试验试管上面浮着的铁粉会分散到培养基中，但是试管壁上粘附的铁粉很难脱落（如图3）。

图3 摇晃后三组试管中铁粉的状态

（从左到右依次为第一组、第二组、第三组）

聽聽通过上面的试验，可以看出，在制备这款培养基试管时，建议先加入铁粉，且使铁粉全部落在试管底部，尽量不要粘在试管壁上，然后再加入培养基，进行灭菌操作。

四、怎样使铁粉分散

聽 试管中先加入铁粉，再加培养基，然后高压灭菌，灭菌完毕，铁粉依然沉积在试管底部，只要趁热充分振荡试管，即可分散到整个试管中（如图4）。

图4 沉积的铁粉混匀前后的状态

五、建议方法与要领

聽 如果配制的试管比较多，逐个试管加入铁粉会显得稍微繁琐，也可以采用下面几种办法，达到上面所说的效果。

聽 （1）将铁粉直接加入待煮培养基中，搅拌均匀，进行煮沸溶解，趁热分装，分装时要不停搅拌。这种情况下，不管凉水中先放入铁粉，还是热水中加入铁粉，灭菌后铁粉会分布在培养基所占体积的试管壁上，底部相对多一些（如图5）。

图5 铁粉与培养基一起搅拌溶解、灭后的状态

聽 （2）如果配制前忘记加铁粉，待培养基煮好后，也可以加入铁粉充分搅拌后，分装、灭菌，这样灭菌后，铁粉也会集中在试管底部，趁热摇匀，铁粉也能分散到整个试管中（如图6）。

图6 铁粉直接加入煮后的培养基中及灭菌后的状态

聽 综上，不管用哪种方式，只要保证灭菌前，铁粉不是漂浮在试管中的培养基上表面，且灭菌完毕后，及时趁热混匀，铁粉就能分散到试管中的培养基中，不会沾到试管上部的壁上，保证使用效果。

六、使用注意事项

聽聽在加样时，需要趁热将样品加入试管中，颠倒数次，在沸水或蒸汽柜中放置15min（加热过程中也需颠倒试管数次），加热后迅速用水冷却试管，待试管内培养基完全凝固后，将试管预热至50℃-55℃厌氧培养48 h。有关结果判断，参考亚硫酸盐琼脂-点击查看。

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