聽 蛋白质的定量方法很多,比较精确的为微量凯氏定氮法，但操作比较麻烦,故一般实验室多用以下3种方法:双缩脲法、Folin酚法和紫外光谱吸收法。

(一)双缩脲法

【原理】

聽 蛋白质中含有肽链[-NH-CO-]与双缩脲试剂中的碱性酒石酸钾钠铜盐作用,形成紫色化合物,肽链愈多,形成的紫色愈深。其显色的程度可用比色法测定

【成分】

【制法】

聽 将酒石酸钾钠和硫酸铜溶解于400ml0.2N氢氧化钠溶液中,然后加入碘化钾,以2N氢氧化钠溶液加至1000ml,放入棕色试剂瓶密盖,置于室温暗处保存备用。

聽

聽(二)Folin 酚法

【原理】

聽 此法亦为比色法,系根据Folin酚试剂与蛋白在碱性溶液中反应,因蛋白量不同而显色程度不同的原理。其显色程度决定于酪氨酸和色氨酸与Folin酚试剂的反应。

【成分】

【制法】

聽 1.Folin酚试剂制备:依次加入硫酸钠、钼酸钠、双蒸水100ml、85%磷酸和浓盐酸试剂于一容器中,煮沸1小时。然后再顺序加入硫酸锂、双蒸水50.0ml、液体溴数滴,重新煮沸15分钟,以除去残余,冷却后加双蒸水至1000.0ml，用滤纸过滤后,装入棕色瓶密盖,置室温暗处保存备用(试剂“1”)

聽 2.2%碳酸钠溶液的制备:将氢氧化钠0.4g加双蒸水至100.0ml,溶解后,再加入2.0g碳酸钠,溶解后放入试剂瓶内保存备用(试剂“2”)。

聽 3.0.5%硫酸铜溶液的制备:将1.0g枸橼酸钠加双蒸水至100.0ml,溶解后,再加入0.50g硫酸铜,溶解后放入试剂瓶内保存备用(试剂“3”)。

聽 4.混合试剂的制备:取1ml试剂“3”加50.0ml试剂“2”充分混合即可备用(试剂“4”)。

聽 5.1/3的Folin酚试剂的制备:1份Folin试剂“1”加2份双蒸水充分混均即可备用(试剂“5”)。

【用法】

聽 取0.1~0.2ml待测蛋白溶液,加1ml试剂“4”(混合试剂),置室温10分钟,然后加入0.1ml试剂“5”,充分混合,分别在30分钟和2小时后,各在500.0或750.0mμ波长读数。

聽 样品测定前需以各种已知浓度的标准蛋白溶液在500.0或750.0mμ波长测光密度,以制出蛋白浓度对光密度的函数图。

【用途】

聽 用于抗体蛋白含量的测定

聽

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