附　录聽A　　培养基和试剂的配制(补充件)
A1　胰(月示)-亚硫酸盐-环丝氨酸(TSC)琼脂　　
胰(月示)聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽15.0g　　
大豆胨聽　　　　　　　　　　　　　　　　5.0g　　
酵母膏　　　　　　　　　　　　　　　　聽5.0g　　
偏亚硫酸氢钠[sodium聽bisulfite(meta)]聽聽聽1.0g　　
柠檬酸铁铵　　　　　　　　　　　　　　聽1.0g　　
琼脂聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽20.0g　
　加蒸馏水稀释到1000mL，调至pH7.6±0.1，分装到500mL烧瓶中，每瓶250mL。121℃高压灭菌15min，倒平皿前，每250mL培养基(50℃)中，加过滤除菌的0.5％聽D-环丝氨酸溶液20.0mL。　
　制作卵黄平板：加50％卵黄乳液20聽mL到250聽mL含D-环丝氨酸培养基中，倾注到无菌平皿中，每皿约15mL。使用前应将平皿置室温使其干燥。
A2　D-环丝氨酸溶液　
　溶解1gD-环丝氨酸于200聽mL磷酸盐缓冲液(c＝0.05mol/L)(pH8.0±0.1)中(不加热)，经0.45μm滤膜过滤除菌。
A3　卵黄乳液　
　用硬刷刷洗鲜蛋，沥干，放70％乙醇中浸泡1h。以无菌操作取出蛋黄，加等体积无菌0.8％氯化钠溶液，混合置4℃贮存。
A4　缓冲动力-硝酸盐培养基　　　
牛肉膏　　　　　　　　　　　　　　　　3.0g　　　
蛋白胨　　　　　　　　　　　　　　　　5.0g　　　
硝酸钾　　　　　　　　　　　　　　　　5.0g　　　
磷酸氢二钠(Na2HPO4)聽　　聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽2.5g　　　
半乳糖　　　　　　　　　　　　　　　　5.0g　　　
甘油　　　　　　　　　　　　　　　　　5.0g　　　
琼脂聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽3.0g　
　用蒸馏水溶解并稀释到1000mL。调至pH7.3±0.1，分装试管，每管11mL。121℃高压灭菌15min。
A5　乳糖-明胶培养基　　　
胰(月示)　　　　　　　　　　　　　聽　15.0g　　　
酵母膏聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽10.0g　　　
乳糖　　　　　　　　　　　　　　　　聽10.0g　　　
磷酸氢二钠(Na2HPO4)　　聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽5.0g聽聽聽聽聽聽
酚红　　　　　　　　　　　　　　　　聽0.05g　　聽
明胶聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽120.0g　
　用蒸馏水溶解并稀释到1000mL，调至pH7.5±0.1，加入乳糖和酚红。分装试管，每管10聽mL。121℃高压灭菌15min。
A6　产芽孢肉汤　　
多价胨(polypeptone)聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽15.0g　　
酵母膏　　　　　　　　　　　　　　　　　聽3.0g　　
可溶性淀粉　　　　　　　　　　　　　　　聽3.0g　　
硫酸镁聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽0.1g　　
硫乙醇酸钠　　　　　　　　　　　　　　　聽1.0g　　
磷酸氢二钠(Na2HPO4)聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽11.0g　
　用蒸馏水溶解稀释到1000mL，调至pH7.8±0.1，分装试管，每管15聽mL。121℃高压灭菌15min。
A7　多价蛋白胨-酵母膏(PY)培养基　　
多价胨聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽20.0g　　
酵母膏　　　　　　　　　　　　　　　　　聽5.0g　　
氯化钠　　　　　　　　　　　　　　　　　聽5.0g　
　用蒸馏水溶解并稀释到1000mL,聽调至pH6.9±0.1,聽分装到带螺帽的试管内,每管9mL。121℃高压灭菌15聽min。
A8　硫乙醇酸盐液体培养基　　
胰酪胨聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽15.0g　　
L-胱氨酸　　　　　　　　　　　　　　　　聽0.5g　　
氯化钠　　　　　　　　　　　　　　　　　聽2.5g　　
葡萄糖　　　　　　　　　　　　　　　　　聽5.0g　　
酵母膏　　　　　　　　　　　　　　　　　聽5.0g　　
硫乙醇酸钠(或硫乙醇酸)　　　　　　　　　聽0.5g　　
刃天青钠溶液(1:1000)(新鲜配制)　　　　　聽1聽mL　　
琼脂聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽0.75g　
　将胱氨酸、氯化钠、葡萄糖、酵母膏和胰胨同1000mL蒸馏水混合，并在阿诺氏消毒器或蒸气浴中加热，直至完全溶解，并加入硫乙醇酸钠或硫乙醇酸溶液，使溶解。如必要可用1mol/L氢氧化钠调整pH，使消毒后的pH在7.1±0.2，加刃天青钠溶液，混合，将培养基分装到150mm×16mm螺旋盖试管内，每管10mL，121℃高压灭菌20min。
A9　蛋白胨水　
　在2000聽mL蒸馏水中溶解蛋白胨2.0g，调至pH7.0±0.1。在200聽mL瓶中分装90聽mL，在500聽mL锥形瓶中分装225聽mL。121℃高压灭菌15min。
A10聽亚硝酸盐试剂
a．试剂甲　　在1000mL聽5mol/L乙酸中溶解对氨基苯磺酸8g；
b.聽试剂乙　　在1000mL聽5mol/L乙酸中溶解α-萘酚5g。
A11聽缓冲甘油-氯化钠溶液　
　在900mL蒸馏水中溶解氯化钠4.2g，加无水磷酸氢二钾12.4g，无水磷酸二氢钾4.0g和甘油100mL，混合，充分溶解。调至pH7.2。121℃高压灭菌15min。　
　配制双料缓冲甘油溶液(20％)时，用甘油200mL和蒸馏水800mL。聽聽聽
聽聽聽

聽

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