聽聽聽
聽聽聽大肠杆菌的检测原理：聽
大肠菌群是一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌，该菌主要来源于人畜粪便，因此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。食品中的大肠菌群数系以100ml(g)检样内大肠菌群最可能数(MPN)表示。聽
2.所需的仪器设备与器具：聽
2.1聽恒温培养箱：36±1℃。聽
2.2聽1000ml三角烧瓶、1ml、10ml移液管。聽
2.3聽接种针。聽
2.4聽显微镜。聽
2.5聽超净工作台。聽
2.6聽玻片、酒精灯、洗耳球、试管架。聽
2.7聽天平：感量0.01g。聽
2.8聽灭菌釜。聽
2.9聽培养皿（直径为90mm）、试管，经121℃、30分钟灭菌。聽
2.10试管夹、酒精灯、秒表、载玻片聽3.培养基及试剂：聽
3.1聽乳糖胆盐发酵管：按照制造厂家使用说明进行配制，灭菌。聽
3.2聽伊红美兰琼脂平板：聽按照制造厂家使用说明进行配制，灭菌。聽
3.3聽乳糖发酵管：聽按照制造厂家使用说明进行配制，灭菌。聽
3.4聽革兰氏染色液。聽
3.4.1聽结晶紫染色液：聽
结晶紫聽1g聽
95%乙醇聽20ml聽
1%草酸铵水溶液聽80ml聽
将结晶紫溶解于乙醇中，然后与草酸铵溶液混合。聽
3.4.2聽革兰氏碘液：聽
碘聽1g聽
碘化钾聽2g聽
蒸馏水聽300ml聽
将碘与碘化钾先进行混合，加入蒸馏水少许，充分振摇，待完全溶解后，再加蒸馏水至300聽ml。聽
3.4.3聽沙黄复染液：聽
沙黄聽0.25g聽
95%乙醇聽10ml聽
蒸馏水聽90ml聽
将沙黄溶解于乙醇中，然后用蒸馏水稀释。聽
3.5聽生理盐水。聽
4.检验程序：聽
检样聽
↓聽
稀释聽
↓聽
乳糖胆盐发酵管，36±1℃，24±2hr聽
↓聽↓聽
不产气聽产气聽
↓聽↓聽
大肠菌群阴性聽伊红美兰琼脂平板，36±1℃，24±2hr聽
↓聽
报告聽↓聽↓聽
革兰氏染色聽乳糖发酵管，36±1℃，24±2hr聽
↓聽
↓聽↓聽↓聽↓聽
G+聽G-，无芽孢杆菌聽产气聽不产气聽
↓聽↓聽
大肠菌群阴性聽大肠菌群阴性聽
↓聽↓聽↓聽
报告聽大肠菌群阳性聽报告聽
4.测定方法：聽
4.1聽检样稀释：聽
4.1.1聽以无菌操作将检样25ml(或25g)放于含有225ml灭菌生理盐水的灭菌塑料烧杯中，经充分振摇成1：10均匀稀释液。聽
4.1.2聽用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，注入含有9ml灭菌生理盐水的聽试管中，振摇成1：100稀释液。聽
4.1.3聽重复5.1.2的操作，使成1：1000稀释液。聽
4.2乳糖胆盐发酵试验：根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计，选择二个稀释度，每一稀释度接种3管，接种量在1ml以上者，用双料乳糖胆盐发酵管。1ml及1ml以下者，用单料乳糖胆盐发酵管。然后置于36±1聽℃培聽
养箱内，培养24±2hr，如所有乳糖胆盐发酵管都不产气，则可报告为大肠菌聽
群阴性；如有产气者，则可按以下程序进行。聽
4.3分离培养：将产气的发酵管分别接种于伊红美兰琼脂平板上，置36±1℃温箱内，培养24hr后取出，观察菌落形态，并作革兰氏染色。聽
4.4证实试验：在上述平板上，挑取可疑大肠菌群菌落1～2个进行革兰氏染色同时接种乳糖发酵管，置于36±1℃温箱内培养24±2hr，观察产气情况。乳糖发酵管产气，革兰氏染色为阴性的无芽孢杆菌，即可报告为大肠菌群阳性。聽
4.5报告：根据证实为大肠菌群阳性的管数，查MPN检索表，报告每100ml(g)大肠菌群的最可能数。聽

聽

上一篇：出口食品中沙门氏菌（辛酯酶荧光）检验方法 SN 0332-94

下一篇：食品中金黄葡萄球菌的检测方法