一、培养基、抗生素、生长因子
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抗生素 |
英文名称及缩写 |
抗性基因 |
贮藏液浓度(mg/ml) |
使用终浓度（μg/ml） |
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链霉菌 |
大肠杆菌 |
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MM |
2CM |
YEME |
LA或LB |
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氨苄青霉素
氯霉素
潮霉素
卡那霉素
壮观霉素
链霉素
硫链丝菌素
红霉素
阿泊拉霉素 |
Ampicillin, Amp聽聽聽聽聽聽聽聽聽 Chloramphenicol, Cml
Hygromycin, Hyg
Kanamycin, Km
Spectinomycin, Spc
Streptomycin, Str
Thiostrepton, Thio
Erythomycin, Ery
Apramycin, Am |
bla
cat
hyg
aac或aph
aadA
str
tsr
ermE
aac(3)IV |
100
25(无水乙醇配)
50
25
50
50
25(DMSO配)
100
50 |
R
10
10
2?
50
10
5
100
10 |
R
－
25
50
50
25
10
－
50 |
R
－
－
－
50
－
2.5
－
50 |
50-100
25
50
50
50
25
不敏感
20
30-50 |
*– 表示无记录或不能使用，贮存液除特别说明外均用无菌水配制
*此表仅供参考！！！
*R表示不敏感
*Km 和Am有交叉抗性，所以同时具有这两种抗性基因时应适当提高抗生素的量，并作好对照。
*Hyg易见光分解，应用锡箔纸包好。
*有些抗生素需要在低盐的环境（如DNA培养基）下筛选效率较高，如Hyg, Km, Vio
聽
LB（Luria-Bertani）培养基
胰蛋白胨 10g，
酵母抽提物 5g，
NaCl 5g，葡萄糖 1g，
蒸馏水加至 1000ml，
pH7.3左右（灭菌后第一次用时还要调一次）
聽
LB中加入终浓度为1.5-2%的琼脂粉(不同的琼脂加的量不同，如青岛琼脂大概需1.5%，而华美的需要2%)。
＊做蓝白斑筛选时不加葡萄糖
溶液：L-天冬酰胺 0.5g，
K2HPO4 聽0.5g,
MgSO4·7H2O聽 0.2g,
FeSO4·7H2O 聽0.01g,
蒸馏水至 1000ml
将每250ml溶液分装到装有2.5g琼脂的500ml三角瓶中，灭菌，使用时每瓶加入50％葡萄糖（8磅灭菌）5ml，调pH7.0。
配置MM的琼脂有lab agar、Ice agar(IA)
聽
R5（1L）链霉菌原生质体转化时用
聽聽 蔗糖聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 103g
聽聽 K2SO4聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 聽聽聽0.25g
聽聽 MgCl2·6H2O聽聽聽 聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽10.12g
聽聽 葡萄糖聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 10g
聽聽 Difco酪蛋白氨基酸聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 0.1g
聽聽 微量元素溶液聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 2ml
聽聽 Oxoid酵母提取物聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 聽聽聽5g
聽聽 TES聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽5.73g
聽 聽加蒸馏水至聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 1000ml
称取5.5g Difco琼脂放入500ml三角瓶中，倒入250ml上述溶液，然后塞上塞子后8磅灭菌（114度15分种）。使用时，将培养基融化，每瓶中加入：
聽聽 KH2PO4(0.5%)聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 2.5ml
聽聽 CaCl2·2H2O(5M)聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 聽聽1ml
聽 聽L-脯氨酸(20%)聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 聽聽聽聽聽聽聽3.75ml
聽聽 NaOH(1M)调pH至7.3聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽
对营养缺陷型菌株加入适当的营养因子（请参考《手册》）
聽
YEME(酵母膏-麦芽膏培养基) 1L（液体培养链霉菌）
聽聽 Oxoid酵母提取物聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 3g
聽聽 Oxoid蛋白胨Tryptone聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 5g
聽聽 麦芽提取物（BD公司原Difco公司218630）聽聽聽 3g
聽聽 葡萄糖聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽10g
聽聽 蔗糖 ＊聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 340g
聽聽 蒸馏水聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 至1000ml
高压灭菌后加入：（8磅灭菌，113－114゜C，15min，自动灭菌锅一次不能灭过多东西，否则会灭不彻底。）
聽聽 MgCl2·6H2O(2.5M)聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 2ml/L
制备原生质体时，还要加入：
聽聽 甘氨酸（20%） 聽＊聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 25ml/L
＊聽聽聽聽 蔗糖的主要作用是维持链霉菌生长时的渗透压。
＊聽聽聽聽 甘氨酸被认为能干扰链霉菌细胞壁的形成，使菌丝体片段更短，利于溶菌，有利于外源DNA的导入。
聽
TSBY （1L）（液体培养链霉菌）
聽聽 Oxoid胰胨豆汤粉（TSB）聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 30g
聽聽 蔗糖＊聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 340g
聽聽 Oxoid酵母抽提物聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 5g
聽 聽蒸馏水 聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽至1000ml
*不同菌株培养需要不同浓度的蔗糖，蔗糖的主要作用是维持链霉菌生长时的渗透压。
聽
将黄豆饼粉加蒸馏水煮2到3小时，用纱布过滤得到滤液，将每250ml滤液分装到装有5g琼脂，5g 甘露醇的500ml三角瓶中，10磅灭菌，使用时调pH7.2-7.3。
聽
2CMY培养基（用于井岗的接合转移）
可溶性淀粉聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 10g聽聽聽聽
胰蛋白胨聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 2g
NaCl聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 1g
(NH4 )2SO4聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 2g
K2 HPO4 聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽1g
CaCO3 聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽2g
无机盐溶液*聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 1 ml
琼脂聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 20g
蒸镏水聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 1000 ml
PH7.2
聽
无机盐溶液(每升)
FeSO4 .7H2 O聽聽聽 1g
MgCl.6 H2 O聽聽聽 1g
ZnSO4. 7H2 O聽聽聽 1g
聽
YMS培养基（阿维，井岗产孢）
酵母抽提物聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 4g
可溶性淀粉聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 4g
麦芽糖聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 10g
CoCl. .6 H2 O聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 5mg
琼脂聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 20g
蒸镏水聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 1000 ml
PH7.2
聽
酵母抽提物聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 4g
麦芽糖 聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽10g
葡萄糖聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 4g
MgCl聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 2g
CaCl聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 1.5g
琼脂聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 15g
蒸镏水聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 1000 ml
PH7.2
聽
聽聽聽聽 天蓝色链霉菌1258 、J1501等都是营养缺陷型菌株，培养这些菌株时一般需向培养基中补加营养因子，使用浓度如表
生长因子补充物的使用浓度表
聽
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化合物 |
储存液（mg/ml）1 |
终作用浓度（μg/ml） |
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组氨酸（Histidine） |
10 |
50 |
|
其它氨基酸2 |
7.5 |
37 |
|
腺嘌呤，鸟嘌呤，
胸腺嘧啶，尿嘧啶 |
1.5 |
7.5 |
|
维生素 |
0.1 |
0.5 |
1.聽聽聽聽聽聽 储存液用无菌去离子水配置，8磅灭菌后4oC保存。
2.聽聽聽聽聽聽 对于半胱氨酸营养缺陷型菌株，补充光氨酸。
聽
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