吡利霉素检测方法
录入时间:2010-3-19 14:40:33
来源：青岛海博论坛论坛
1．分析目标化合物聽聽聽
聽
吡利霉素（对于肝脏，吡利霉素和吡利霉素亚砜）
2．仪器设备
液相色谱—质谱仪。
3．试剂
聽聽聽 除下列试剂外，使用附录2所列试剂。
聽聽聽 盐酸吡利霉素一水合物标准品：含盐酸吡利霉素一水合物97%以上，熔点为210.5聽℃～聽212.5聽℃。
聽聽聽 二乙烯基苯－聽N－乙烯基吡咯烷酮共聚物小柱（60聽mg）：内径12～13mm聽聚乙烯管中填充60mg二乙烯基苯－聽N－乙烯基吡咯烷酮共聚物或具有同等分离特性的物质。
4．試验溶液的制备
1)聽肌肉
①提取方法
聽聽聽 尽可能除去脂肪层，搅碎混合均匀后，称取其5.00g。加入100聽mL甲醇：0.2%偏磷酸溶液(3：7)混合溶液，搅拌后，用涂布2～3聽mm聽厚硅藻土的滤纸抽滤于磨口减压浓缩器中。取出滤纸上的残留物，加入20mL甲醇：0.2%偏磷酸溶液(3：7)混合溶液，搅拌后，按上述同样操作，合并滤液于减压浓缩器中，40℃以下浓缩至约30mL。聽聽聽
②净化方法
聽聽聽 在二乙烯基苯－N－乙烯基吡咯烷酮共聚物小柱（60聽mg）中，依次注入5mL甲醇和5mL水，舍弃流出液。柱中注入①提取方法所得的溶液后，注入5mL水，舍弃流出液。注入5mL甲醇，收集流出液于磨口减压浓缩器中，40℃以下除去甲醇。残留物中加入1.0mL乙腈：0.05%三氟乙酸（1：3）混合溶液溶解，此为试验溶液。
2)脂肪
①提取方法
聽聽聽 尽可能除去肌肉层，搅碎混合均匀后，称取其5.00g。加入30聽mL正己烷和70聽mL聽0.2%的偏磷酸溶液，搅拌后，以每分钟3000转离心分离5分钟。收集0.2%偏磷酸层，用涂布2～3mm聽厚硅藻土的滤纸抽滤于磨口减压浓缩器中。取出滤纸上的残留物，加入20mL甲醇：0.2%偏磷酸溶液(3：7)混合溶液，搅拌后，按上述同样操作，合并滤液于减压浓缩器中，40℃以下浓缩至约30mL。聽聽聽
②净化方法
聽聽聽 采用1）肌肉的②净化方法。聽
聽聽聽聽聽聽聽聽聽 3)肝脏，肾脏，奶及其它食用部分：
①提取方法
聽聽聽 肝脏：搅碎混合均匀后，称取其5.00g，在37聽℃下放置24小时。
聽聽聽 肾脏及其它食用部分：搅碎混合均匀后，称取其5.00g。
聽聽聽 奶：称取5.00g样品。
聽聽聽 加入100聽mL甲醇：0.2%偏磷酸溶液(3：7)混合溶液，搅拌后，加入3g硅藻土混合，用涂布2～3聽mm聽厚硅藻土的滤纸抽滤于磨口减压浓缩器中。滤纸上的残留物中加入20mL甲醇：0.2%偏磷酸溶液(3：7)混合溶液，再搅拌后，按上述同样操作，合并滤液于减压浓缩器中，40℃以下浓缩至约30mL。聽聽聽
②净化方法
聽聽聽 采用1）肌肉的②净化方法。
5．标准曲线的制作
聽聽聽 将盐酸吡利霉素一水合物标准品配制成10聽mg（以吡利霉素计）/100mL甲醇溶液，用乙腈：0.05%三氟乙酸混合溶液稀释，配制成在0.05聽～10聽mg（以吡利霉素计）/L范围的溶液数点，分别注入LC/MS，用峰高法或面积法绘制成标准曲线。
6．定量试验
注入试验溶液于LC/MS中，根据5的标准曲线求出吡利霉素的含量。
7．测定条件
LC/MS
柱：十八烷基甲硅烷基化硅胶（粒径2聽～5聽μm），内径2.0～6.0聽mm、长100聽～250mm不锈钢管。
柱温：40聽℃
流动相：乙腈：0.05%三氟乙酸（1:3）混合溶液。
主离子(m/z)：聽ESI+聽411
保留时间标准：4～6聽分钟
8．定量限
0.01聽mg/kg。
9．注意事项
1)检测方法概述
肝脏样品，因代謝物吡利霉素亚砜要转变为吡利霉素，所以在37℃放置24聽小时。
本方法用甲醇与0.2%偏磷酸溶液的混合溶液从样品中提取吡利霉素，经二乙烯基苯－聽N－乙烯基吡咯烷酮共聚物小柱净化后，LC/MS测定和确证。
2)聽注意点
①聽对于LC/MS，标准溶液和试验溶液的标准进样量，内径3.0聽mm聽柱子为10聽μL。因柱子和仪器设备使最佳进样量不同，必须研究最佳的进样量。
②采用主离子的仪器设备，因为最适合的离子化方法、生成的离子不同，要研究仪器设备最合适的条件。
对于主离子之外的确证离子，ESI+为363(m/z)。
聽
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