1)生活饮用水或食品生产用水的检验：

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聽聽聽 ①初步发酵试验：

聽聽聽 在2个各装有50mL的3倍浓缩乳糖胆盐蛋白胨培养液(可称为三倍乳糖胆盐)的三角瓶中(内有倒置杜氏小管)，以无菌操作各加水样100mL。在10支装有5mL的三倍乳糖胆盐的发酵试管中(内有倒置小管)，以无菌操作各加入水样10mL。如果饮用水的大肠菌群数变异不大，也可以接种3份100mL水样。摇匀后，37℃培养24h。

聽聽聽 ②平板分离：

聽聽聽 经24h培养后，将产酸产气及只产酸的发酵管(瓶)，分别划线接种于伊红美蓝琼脂平板(EMB培养基)上，37℃培养18—24h。大肠菌群在EMB平板上，菌落呈紫黑色，具有或略带有或不带有金属光泽，或者呈淡紫红色，仅中心颜色较深；挑取符合上述特征的菌落进行涂片，革兰氏染色，镜检。

聽③复发酵试验：

聽将革兰氏阴性无芽胞杆菌的菌落的剩余部分接于单倍乳糖发酵管中，为防止遗漏，每管可接种来自同一初发酵管的平板上同类型菌落1—3个，37℃培养24h，如果产酸又产气者，即证实有大肠菌群存在。

聽聽聽 ④报告：

聽聽聽 根据证实有大肠菌群存在的复发酵管的阳性管数，查表2（或表3），报告每升水样中的大肠菌群数(MPN)。

聽聽聽 2)水源水的检验：

聽聽聽 用于检验的水样量，应根据预计水源水的污染程度选用下列各量。

聽聽聽 ①严重污染水：1，0．1，0．01．0．00lmL各1份。

聽聽聽 ②中度污染水：10．1，0．1，0．01mL各1份。

聽聽聽 ③轻度污染水：100，10，1，0．1mL各l份。

④大肠菌群变异不大的水源水：10mLl0份。

表2 大肠菌群检索表（饮用水）

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聽表3 大肠菌群数变异不大的饮用水

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表4 大肠菌群检索表（严重污染水）

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聽表5大肠菌群检索表（中度污染水）

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聽表6大肠菌群检索表（轻度污染水）

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表7 大肠菌群变异不大的水源水

操作步骤同生活用水或食品生产用水的检验。同时应注意，接种量1mL及1mL以内用单倍乳糖胆盐发酵管；接种量在1mL以上者，应保证接种后发酵管(瓶)中的总液体量为单倍培养液量。然后根据证实有大肠菌群存在的阳性管(瓶)数，查表4、表5、表6或表7，报告每升水样中的大肠菌群数(MPN)。

聽聽聽 附：滤膜法

聽聽聽 滤膜法所使用的滤膜是一种微孔滤膜。将水样注入已灭菌的放有滤膜的滤器中，经过抽滤，细菌即被均匀地截留在膜上，然后将滤膜贴于大肠菌群选择性培养基上进行培养。再鉴定滤膜上生长的大肠菌群的菌落，计算出每升水样中含有的大肠菌群数(MPN)。

聽聽聽 (1)准备工作：

聽聽 聽聽聽聽聽1)滤膜灭菌：

将3号滤膜放入烧杯中，加入蒸馏水，置于沸水浴中蒸煮灭菌3次，每次15min。前两次煮沸后需换无菌水洗涤2-3次，以除去残留溶剂。

聽聽聽 2)滤器灭菌：准备容量为500mL的滤器，用点燃的酒精棉球火焰灭菌，也可用121℃高压灭菌20min。

聽聽聽 聽3）培养：

将品红亚硫酸钠培养基放入37℃培养箱内预温30-60min。

聽聽聽 (2)过滤水样：

聽聽聽聽1)用无菌镊子夹取灭菌滤膜边缘部分，将粗糙面向上贴放于已灭菌的滤床上，轻轻地固定好滤器漏斗。水样摇匀后，取333mL注入滤器中，加盖，打开滤器阀门，在—50kPa压力下进行抽滤。

聽聽聽 2)水样滤完后再抽气约5s，关上滤器阀门，取下滤器，用无菌镊子夹取滤膜边缘部分，移放在品红亚硫酸钠培养基上，滤膜截留细菌面向上与培养基完全紧贴，两者间不得留有间隙或气泡。若有气泡需用镊子轻轻压实，倒放在37℃培养箱内培养16-18h。

聽聽聽 (3)结果判定：

聽聽聽 1)挑选符合下列特征的菌落进行革兰氏染色，镜检。

聽聽聽 ①紫红色，具有金属光泽的菌落。

②深红色，不带或略带金属光泽的菌落。

聽聽 ③淡红色，中心颜色较深的菌落。

聽聽聽 2)凡是革兰氏阴性无芽胞杆菌，需再接种于乳糖蛋白胨半固体培养基，37℃培养6-8h，产气者，则判定为大肠菌群阳性。

聽聽聽 3)1L水样中大肠菌群数等于滤膜法生长的大肠菌群菌落数乘以3。