(七)固定液和保存液
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用固定液固定动植物整体或它的一部分组织和气管等,能保存组织内细胞的形态、结构及其组成,尽量使它近于生活状态。固定液一般有防腐和保存的作用,分为单纯固定液和混合固定液。单纯固定液中最重要的有乙醇、福尔马林、醋酸、苦味酸、铬酸、重铬酸钾、升汞等,前两种固定液是中学生物实验室常用的。单纯固定液的优点是简便,缺点是有一定的局限性,不易达到理想的固定要求。混合固定液有几种不同的药液按一定的比例混合而成,使各自的优缺点相互补充,成为较完美的固定液。这种固定液的制备虽比较麻烦,但是效果比较好。常用的混合固定液是醋酸-酒精混合液、福尔马林-醋酸-酒精液、包因氏固定液等。
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常用的保存液大致跟固定液相同,主要是福尔马林、酒精、甘油以及由这些药物按比例配制成的各种混合液。有时按特殊保存的需要,再保存液中增加某些药品(如原生标本的保存液)。
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1、福尔马林
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福尔马林在固定组织标本时杀菌能力强,所以防腐性强,渗透力大,固定得快。永福尔马林固定精细的解剖标本时,要跟甘油、酒精、石炭酸等混合使用。
固定液常用的浓度是5~10%(根据材料的大小、性质和数量而定)。
保存液常用的浓度是5~10%。用福尔马林作保存液,效果好且价格低廉。
在配制福尔马林溶液(固定液或保存液)时,应将37~40%的甲醛作为整个溶质来配。例如配制5%福尔马林是取市售37~40%甲醛溶液5毫升跟95毫升蒸馏水混合。实际上甲醛含量只有1.9~2%,这样的配法已成为一般实验室常用的惯例。
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注意事项:
(1)福尔马林业在长期贮存中会产生蚁酸,可适量的加入碳酸钙或碳酸镁等碱性物质进行中和。
(2)福尔马林业作为保存液会慢慢挥发而致使浓度降低,并且福尔马林液再保存中往往形成多聚甲醛,使浸液变浊,影响观察。所以,根据一定保存期的情况,可适当增加福尔马林液的浓度或更换新液,以防标本变坏。其中如有白色沉淀物,加热后可使它溶解。
(3)市售的福尔马林液常带有酸性,能腐蚀石灰质,因此,最好不用福尔马林液浸制有石灰质外壳的动物。
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2、酒精(乙醇)
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酒精也是常用的固定液,它有强烈的杀菌作用,对组织材料的渗透力较大,固定的快。但是,它的脱水作用较强,在高浓度的酒精中容易使材料显著硬化和收缩。一般用于固定浸制标本材料,分一级或二级固定,即70%或50%与70%的酒精。有些小型材料或精细的解剖材料,最好用二级或三级固定,即用50%、70%或50%、60%、70%的酒精,最后再进行保存。从经济效果来考虑,一般酒精应跟福尔马林液等固定液混合使用。
市售的工业用酒精浓度是95%左右,因此用时要重新配制。保存液的浓度通常是70%。
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注意事项:
(1)在固定材料时要注意固定的效果,小型材料一般放在固定液中固定。大型材料必须先往体内注射一部分固定液,再放入固定液中,防止材料内部腐怀变质。用福尔马林液固定也是如此。
(2)高浓度的酒精有脱水、脱脂作用。含有多量脂肪或拟脂标本(如脑、脊髓)等都不宜用较高浓度的酒精作保存液。
(3)为了防止酒精使标本硬化,保存一些精细的材料或解剖标本时,因加入少量甘油,因为甘油具有润软组织的作用。
(4)忌跟铬酸、锇酸和中铬酸钾等氧化剂配合。
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3、醋酸
醋酸即乙酸,纯醋酸在低于16.7摄氏度时会凝成冰状固体,所以叫冰醋酸。醋酸能很快穿透组织,因为它不能沉淀细胞质中的蛋白质,组织不会硬化。一般常跟酒精、福尔马林、铬酸等容易引起组织变硬和收缩的液体混合,以起到相互抵消的作用。
醋酸固定液的常用浓度是0.3%~5%。
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4、苦味酸
苦味酸是一种黄色结晶,能溶于水(溶解度是0.9~1.2%)、酒精(溶解度是4.9%)和苯(溶解度是10%)。苦味酸也能沉淀一切蛋白质,穿透较慢,固定后,组织收缩明显,但不使组织硬化。
苦味酸固定液可以在100毫升蒸馏水中加入苦味酸约1.5克,制成饱和水溶液。固体苦味酸易爆,长制成饱和水溶液保存。
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5、升汞
升汞又叫氯化汞,是白色粉末,以针状结晶为最纯。通常固定时用饱和水溶液,有时也用70%酒精作溶剂,不单独用作固定剂。升汞的穿透力较弱,通常用于小型材料,对蛋白质有强烈的沉淀作用,硬化程度中等。
固定液用饱和溶液,浓度约为7%。
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6、卡尔氏(Carl's)液
配方
95%酒精 170毫升 蒸馏水 280毫升
福尔马林 60毫升 冰醋酸 20毫升
冰醋酸要在临用前加入。
这时极好的昆虫保存液,常用来杀死和保存小型、身体柔软的种类入螨、蜈蚣、马陆等。在这溶液里加入少量甘油,能防止虫体变脆。
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7、卡诺氏(Carnoy's)液
配方
纯酒精 6份 冰醋酸 1份
氯仿 3份
这种固定液能固定细胞质和细胞核,尤其适宜于固定染色体,所以多用于细胞学的质片,还用来固定腺体、淋巴组织以及原生动物的胞壳等。这种固定液穿透得快,因此一般小块组织固定20~40分钟,大型材料不超过3~4小时。固定后用95%或纯酒精洗涤,换液两次,移到石蜡中或用80%酒精保存。
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8、吉尔桑氏(Gilson)液
配方
60%酒精 50毫升 冰醋酸 2毫升
80%硝酸 7.5毫升 升汞 10克
蒸馏水 440毫升
这是常用的固定液,适用于肉质菌类,特别是柔软胶质状的材料如木耳等,也广泛用于无脊椎动物和一般组织和蛙胚的固定。固定时间18~20小时,然后用50%酒精冲洗材料,除去升汞。如果用水冲洗,会使材料膨胀。混合液保存24小时后失效。
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9、福尔马林--醋酸--酒精溶液(FAA)液
配方
50%酒精 85毫升 福尔马林 10毫升
冰醋酸 5毫升
这种固定液适用于固定一般植物茎、叶组织,昆虫和甲壳类动物。液组织在这溶液里固定12小时,木质化组织要固定1周,材料也可在此液中长期保存。固定后的材料放在50%酒精中冲洗1~2次。
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10、克来宁堡氏(Kleinenberg's)液
配方
在20%硫酸水溶液内加入苦味酸,直到饱和。
这种固定液适用于鸡胚的固定,也用于许多小型海洋生物的固定。
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11、包因氏(Bouin's)液
配方
苦味酸饱和水溶液 75毫升 冰醋酸 5毫升
福尔马林 25毫升
这是常用的良好固定剂,渗透迅速,固定均匀,组织收缩少,染色后能显示一般的微细结构。一般动物组织、无脊椎动物的卵和幼虫以及一般组织学、胚胎学的材料,如植物组织的根尖和胚囊都可用它来固定。一般组织固定24~48小时,小块组织固定4~16小时,动物材料能在这种固定液中长期保存。固定后,动物材料用70%酒精冲洗净苦味酸,到无黄色为止(用酒精冲洗时,加几滴氨水,可加快除去黄色);植物材料用20%酒精冲洗几次。
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12、绍丁氏(Schaudinn's)液
配方
甲液 升汞饱和水溶液 66毫升
95%酒精 33毫升
乙液 冰醋酸 1毫升
甲、乙液要在临用前混合。
这种固定液适用于固定有鞭毛的原生动物、植物的精子和游动孢子等。材料如制作涂布装片,可在40摄氏度下固定10~20分钟。
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13、眼球固定液
配方
丙酮 40毫升 冰醋酸 1.5毫升
升汞 2克 甲醛 10毫升
蒸馏水 40毫升
这种固定液适用于眼球的固定,并可在固定液中长期保存。
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14、纳瓦兴氏(Nawaschin's)液
配方
甲液 铬酸 1.5克 冰醋酸 10毫升
蒸馏水 90毫升
乙液 福尔马林 40毫升 蒸馏水 60毫升
临用前将等量甲、乙液混合。
高等植物有丝分裂材料适宜在这种固定液里固定或长期保存。
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15、绿色标本保存液
配方一
硫酸铜 5克 水 95毫升
这种保存液适用于绿色植物和一切植物绿色部分的保存。植物放入硫酸铜液后,由绿变黄,再由黄变绿。这时取出材料,用清水漂洗干净,浸在5%福尔马林液内长期保存。
配方二
硫酸铜 0.2克 95%酒精 50毫升
福尔马林 10毫升 冰醋酸 5毫升
水 35毫升
先把硫酸铜溶于水中,然后加入配方中的其他组分。绿色标本能长期的贮存在该液中。
配方三
醋酸铜 15~30克 50%醋酸 100毫升
在50%醋酸中逐渐加入醋酸铜,直到饱和。适用时取原液1份,加水4份,即成稀释的硫酸铜溶液。
这种保存液适用于表面有蜡质、蛙质、质地较硬的绿色植物保色。加热稀释到醋酸铜溶液,放入植物,轻轻翻动,到植物由绿转黄再转绿色时取出植物,用清水漂洗后,浸入5%福尔马林液内保存。
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16、红色标本保存液
配方一
甲液 硼酸 3克 福尔马林 4毫升
水 400毫升
乙液 亚硫酸 2毫升 硼酸 10克
水 488毫升
把红色的果实浸在甲液里1~3天,等果实由红色转深棕色时取出,移到乙液里保存,同时在果实内注入少量乙液。
配方二
氯化锌 2份 福尔马林 1份
甘油 1份 水 40份
先把氯化锌溶解在水里,然后加入配方中其他组分。溶液如果浑浊而有沉淀,应过滤后使用。红色果实能在此液中保存。
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17、黄色标本保存液
配方一
甲液 硫酸铜 5克 水 95毫升
乙液 6%亚硫酸 30毫升甘油 30毫升
95%酒精 30毫升 水 900毫升
先把植物标本在甲液中浸1~2天,取出洗净后,浸入乙液中保存,同时在果实内注入少量乙液。
配方二
6%亚硫酸 568毫升 80%酒精 568毫升
水 450毫升
植物材料能在这种保存液中长期保存。
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18、紫色标本保存液
配方一
95%酒精 20毫升 福尔马林 20毫升
水 60毫升
使用时,取1份原液加9份水稀释,植物材料能在这溶液中保存。
配方二
食盐饱和水溶液 30毫升 水 175毫升
福尔马林 20毫升 甘油 少量
植物材料能在这溶液中保存。
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19、白色标本保存液
配方一
甲液 5%硫酸铜溶液
乙液 1~4%亚硫酸溶液
全白色植物材料能浸在乙液中保存。杂有绿色的白色植物材料先浸在5%硫酸铜溶液内1~3天,用清水漂洗后浸在乙液中保存。
配方二
氯化锌 32克 95%酒精 125毫升
水 1000毫升
把氯化锌溶于水中,再加入酒精。植物材料能在这溶液中保存。
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20、绿色幼虫保存液
甲液 福尔马林 4毫升 醋酸铜 1克
硝酸钾 1克 水 100毫升
乙液 甘油 20毫升 醋酸钾 10克
福尔马林 1毫升 水 100毫升
先把昆虫幼虫放在80摄氏度热水中烫死,晒干后放在甲液中固定1星期左右,最后放入稀释一倍的乙液中保存。
配方二
甲液 95%酒精 90毫升甘油 2.5毫升
福尔马林 2.5毫升 冰醋酸 2.5毫升
氯化铜 3克
乙液 冰醋酸 5毫升 福尔马林 4毫升
水 100毫升
将绝食1~2天的幼虫,用注射器从肛门向体内注射甲液,12小时后转入乙液内保存,约20天更换1次乙液。
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21、黄色幼虫保存液
甲液 苦味酸饱和液 10毫升 冰醋酸 5毫升
福尔马林 2.5毫升
乙液 与绿色幼虫保存液配方二乙液相同
用注射器从幼虫肛门内注入甲液,12小时后转入乙液内保存。
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22、红色幼虫保存液
硼砂 2克 50%酒精 100毫升
昆虫幼虫能在这溶液中保存。
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23、动物内脏原色保存液
甲液 福尔马林 200毫升 硝酸钾 15克
醋酸钾 30克 水 1000毫升
乙液 甘油 200毫升 醋酸钾 100克
麝香草酚 2.5克 水 1000毫升
先把材料放在甲液内固定,固定时间根据材料的大小而定,一般需1~5天。当材料失去自然色泽而呈暗褐色时,用手轻轻挤压,直到没有淡红色血水流出时,取出材料,用清水冲洗,在浸在85%酒精中3~24小时(不能太久,否则易破坏色素),到血色恢复后,浸在乙液中保存。
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