1目的
1.1理解冷冻干燥保藏菌种的原理
1.2掌握冷冻干燥保藏菌种的方法。
2 原理
冷冻干燥保藏菌种法可克服简单保藏方法的不足。利用有利于菌种保藏的—切因素，使微生物始终处于低温、干燥、缺氧的条件下，因而它是迄今为止最有效的菌种保藏法之一。
3 材料
3.1 菌株聽
待保藏的各种菌种。
3.2试剂
2%聽HCl；牛奶。
3.3器具聽聽
安瓿管、标签、长滴管、脱脂棉、干冰、离心机、冷冻真空装置、高频电火花器。
4聽流程
备安瓿管→备脱脂乳→制菌悬液→分装→预冻→真空干燥→保藏→活化
5步骤
5.1准备安瓿管
安瓿管先用2%HCl浸泡，再水洗多次，烘干。将标签放入安培管内，管口塞上棉花，灭菌备用。
5.2制备脱脂乳
用鲜奶经处理或使用脱脂奶粉配兑脱脂牛奶，灭菌，并做无菌试验后备用。
5.3制菌悬液
将无菌牛奶直接加到待保藏的菌种斜面内，用接种环将菌种刮下，轻轻搅乱使其均匀地悬浮在牛奶内成悬浮液。
5.4分装
用无菌长滴管将悬浮液分装入安瓿管底部，每支安培管的装量约为0.9毫升。(一般装入量为安瓿管球部体积的1／3)
5.5预冻
将分装好的安瓿管在-25至-40之间的干冰酒精中进行预冻1小时；或在冰箱冷冻室进行预东。
5.6真空干燥
预冻以后，将安瓿管放入真空器中，开动真空泵进行干燥。
5.7封管
封管前将安瓿管装入歧管；真空度抽至0.01毫米汞拄后，再用火焰熔封，封好后，要用高频火花器检查各安瓿管的真空情况。如果管内呈现灰蓝色光，证明保持着真空。检查时高频电火花器应射向安瓿管的上半部。
5.8保藏
做好的安瓿管应放置在低温避光处保藏。
5.9活化
如果要从中取出菌种恢复培养，可先用75%酒精将管的外壁消毒，然后将安瓿管上部在火焰上烧热，再滴几滴无菌水，使管子破裂。在用接种针直接挑取松散的干燥样品，在斜面接种。
6结果聽
6.1简述真空冷冻干燥保藏菌种的原理。
6.2聽记录大肠杆菌斜面作液体石蜡封藏和枯草杆菌作沙土管保藏的要点。
7思考
7.1菌种保藏中，石蜡油的作用是什么？
7.2经常使用的细菌菌株，使用那种保藏方法比较好？
7.3沙土管法适合保藏那一类微生物？
聽
聽
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