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      结核杆菌毒力试验及浓缩集菌



      录入时间:2011-6-27 15:01:07 来源:青岛海博论坛论坛

      结核杆菌毒力试验——动物试验法
      【材料】
      1. 动物:体重200~250克豚鼠2只
      2. 结核杆菌培养物或结核病人检验材料(痰、尿、粪、腹水等材料经浓缩集菌)
      3. 注射器及消毒用材料等。
      【方法】
      1. 选取结核菌素试验为阴性的豚鼠两只。
      2. 吸取结核杆菌悬液或病人检材,注入豚鼠腹股沟皮下0.1ml
      3. 注射后每周定期检查一次,观察豚鼠腹股沟淋巴结是否肿大,局部变硬,化脓及体重减轻、体温升高等症状。
      4. 给豚鼠作结核菌素试验,是否出现阳性结果。
      5. 6周后,将豚鼠进行解剖,观察淋巴结是否肿大,有无干酪性病变,肝、脾、肺等是否肿大,表面有无灰白色结节病灶,取可疑病灶进行涂片染色镜检和分离培养。若为阳性结果,可报告“动物接种后××天查到有结核菌感染”。如无症状及病变者,可报告为阴性。
      结核杆菌浓缩集菌法(以处理痰标本为例)
      材料:结核病人24小时痰液,细口瓶,0.02%酚红液、汽油,NaOH,无菌生理盐水等。
      (一)漂浮法:
      1. 取24小时痰液15毫升,装入细口瓶内,加入2倍量0.5%NaOH摇匀,高压灭菌或煮沸20—30分钟杀菌。
      2. 待冷后加入汽油2毫升(二甲苯也可以),用力振荡20—30分钟,用生理盐水加至液面与瓶口齐,静置半小时。
      3. 取瓶口表面油状物涂于载物玻片上,微微加热,干后再加,如此重复5—6次,至厚度适宜,烘干待冷,抗酸染色,油镜头检查。
      (二)沉淀法:
      1. 取痰液1份或2倍量4%NaOH,高压无菌或煮沸20—30分钟后,加入0.02%酚红指示剂0.1毫升,剧烈振荡混匀,亦可置37℃水浴消化30分钟。
      2. 矫正PH为7.0,3000转/分离心30分钟,弃去上清液。
      3. 取沉淀物涂片染色镜检。若进行分离培养和动物接种,可免去高压灭菌或煮沸的程序。
      《附录》
      抗酸染液的配制
      1. 石炭酸复红液:称取硷性复红4克,溶于95%酒精100毫升中成饱和液。再取饱和液10毫升与5%石炭酸溶液90毫升混匀即成。
      2. 3%盐酸酒精:取浓盐酸3毫升,95%酒 97毫升混合。
      3. 吕弗勒氏硷性美兰液:称取美兰2克,溶于95%酒精100毫升中,配成饱和液,取饱和液30毫升,再加入蒸馏水100毫升及10%氢氧化钾水溶液0.1毫升即成。

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