一、目的

聽聽聽聽 由核蛋白组成的病毒有特有的紫外吸收峰，通过紫外分光光度计使用，掌握其测定原理、操作方法及病毒纯度与定量的方法。

二、主要仪器、用具及药剂

聽聽聽 紫外分光光度计、石英比色皿、移液管、吸管、试管、缓冲液、镜头纸。

三、实验材料

聽聽聽 TMV或CMV等病毒提纯样品悬浮液。

四、实验步骤

聽聽 １．准备好提纯品及参比溶液，倒入石英比色杯。
聽聽 ２．打开稳压电源及751分光光度计，将比色杯装入样品槽。
聽聽 ３．按附录操作程序使用紫外光测量样品在波长260nm及280nm处的光吸收值(以A或OD值表示)记录数值。
聽聽 ４．每种病毒的蛋白与核酸含量有固定比例( 附表) ，用本次试验吸收光谱比值(A260/A280)与标准比值比较。

聽聽 ５．用A260值计算病毒的浓度及产量。
聽 病毒浓度(mg/ml)=A260X稀释倍数／E0.1%1cm260nm，

聽聽聽 E为消光系数，即在波长260nm时，浓度为0 ·1％(1mg/ml)的悬浮液，光程为1cm时的光(光密度)吸收值。对已知病毒可以从附表中查到；对未知病毒要想定量病毒，先把病毒纯品干燥称重，配成已知浓度的病毒悬液，在260nm下测其光密度，并折算成E0.1%聽1cm。

聽聽聽 病毒产量(mg/kg)＝浓度X提纯总ml数X1000/组织重(g)
[注意：测量时所用测量杯的宽度应是1cm，若杯宽为0.5cm，则所得光密度值应乘以2] 。由于光散射的影响，所测定的光密度大于病毒实际上的吸收光密度，因而存在误差。因此，准确测定常常对测定的光密度进行校正(见附录)。

附表：几种植物病毒的消光系数(E值)和A260/A280值

聽聽聽聽 病毒种类聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 E0.1%1cm260nm聽聽聽聽聽聽 A260/A280

聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 (TMV)聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 3聽 1聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 1聽 19
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