聽1聽聽主题内容与适用范围聽
本标准规定了产气荚膜梭菌的检验方法。聽
本标准适用于食品和食物中毒样品中产气荚膜梭菌的检验。聽
2聽聽引用标准聽
聽聽聽聽GB聽4789.28聽聽食品卫生微生物学检验聽聽染色法、培养基和试剂聽
3聽聽设备和材料聽
3．1聽聽均质器。聽
3．2聽聽显微镜。聽
3．3聽聽温箱：36±1℃。聽
3．4聽聽水浴。聽
3．5聽聽厌氧培养装置：常温催化除氧式或碱性焦性没石子酸除氧式。聽
3．6聽聽吸管：1聽mL，10聽mL。聽
3．8聽聽平皿。聽
3．9聽聽接种环或接种针。聽
聽
4聽聽培养基和试剂聽
4．1聽聽庖肉培养基：GB聽4789.28聽中聽4.67。聽
4．2聽聽亚硫酸盐-多粘菌素-磺胺嘧啶琼脂（SPS）聽：GB聽4789.28聽中聽4.69。聽
4．3聽聽液体硫乙醇酸盐培养基（FT）聽：GB聽4789.28聽中聽4.70。聽
4．4聽聽动力-硝酸盐培养基：GB聽4789.28聽中聽4.72。聽
4．5聽聽含铁牛奶培养基：GB聽4789.28聽中聽4.71。聽
4．6聽聽卵黄琼脂培养基：GB聽4789.28聽中聽4.68。聽
4．7聽聽0.1%蛋白胨水稀释剂：GB聽4789.28聽中聽4.86。聽
4．8聽聽硝酸盐还原试剂：GB聽4789.28聽中聽3.17。聽
4．9聽聽革兰氏染色液：GB聽4789.28聽中聽2.2。聽
5聽聽检验程序聽
聽聽聽聽产气荚膜梭菌检验程序如下：聽
6聽聽操作步骤聽
6．1聽聽活菌计数培养聽
6．1．1聽聽按无菌操作称取食品检样聽25聽聽g（mL）放入均质器，加聽0.1%蛋白胨稀释剂聽225聽mL，低速搅动聽1～2聽min，使之均质化，作为聽1：10聽稀释液。聽
6．1．2聽聽以上述聽1：聽10稀释的均质液按聽1聽聽mL加0.1%蛋白胨稀释剂9mL做成10^-2～10^-6的系列稀释液。聽
6．1．3聽聽吸取各稀释液聽1聽mL聽分别放入聽2聽个灭菌平皿内。每个平皿浇注约聽50℃的聽SPS聽琼脂聽15～20聽mL，仔细转动平皿，使稀释液和琼脂充分混匀。聽
6．1．4聽聽上述琼脂平板凝固后，倒置于厌氧培养装置内，于聽36±1℃培养聽24聽聽h。聽聽
6．1．5聽聽选取长有聽30～300聽个黑色菌落的平板，计数黑色菌落数。聽
6．2聽聽确证试验聽
6．2．1聽聽由平板上任取聽10聽个黑色菌落，分别按种聽FT聽培养基，于聽36±1℃培养18～24聽h。聽
6．2．2聽聽用上述培养液涂片，革兰氏染色镜检。产气荚膜梭菌为革兰氏阳性粗大杆菌，其耐热株可能形成卵形芽孢，位于菌体中央或近端，其宽度一般不大于菌体。聽
6．2．3聽聽用接咱环（针）穿刺接种动力-硝酸盐培养基，于聽36±1℃培养聽24聽h，观察接种线的生长情况，判断有无动力。然后，滴加甲萘胺液和对氨基苯碘酸液各聽0.5聽mL，观察硝酸盐是否被还原。产气荚膜梭菌无动力，能将硝酸盐还原为亚硝酸盐。聽
6．2．4聽聽取生长旺盛的聽FT聽培养液聽1聽聽mL聽接种于含铁牛乳培养基，在聽46℃水浴中培养聽2聽h后观察有无“暴烈发酵”现象，5聽h聽内发酵者为阴性。产气荚膜梭菌发酵乳糖，凝固酪蛋白并大量产气，呈“暴烈发酵”现象，但培养基不变黑。聽
6．2．5聽聽用接种环取聽FT聽培养液点种于卵黄琼脂平板（每张平板至少可接种聽10点）聽，于聽36±1℃厌氧培养聽24聽h，观察接种点的变化。产气荚膜梭菌产生卵磷脂酶，分解卵黄中的卵磷脂，接种点的底部及周围形成乳白色的混浊带。聽
6．3聽聽菌数计算聽
根据黑色菌落的计数（6.1.5）和确证试验的结果（6.2）聽，计算每克（毫升）食品检样的含菌数。聽例如：10^-4稀释液的平板长有黑色菌落聽100聽个，而供做确证试验的聽10聽个菌落中有聽7聽个被确证为产气荚膜梭菌，则每克（毫升）食品检样所含产气荚膜梭菌数为：聽100×0.7×10⁴=7×10⁵
附加说明：聽
本标准由卫生部卫生监督司提出。聽
本标准由卫生部兰州生物制品研究所负责起草。聽
本标准主要起草人王成怀。聽
本标准由卫生部委托技术归口单位卫生部食品卫生监督检验所负责解释。聽聽聽
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