聽
1聽聽主题内容与适用范围聽
本标准规定了食品中溶血性链球菌的检验方法。聽
本标准适用于食品和食物中毒样品中溶血性链球的检验。聽
2聽聽引用标准聽
聽聽聽聽GB聽聽4789.28聽聽食品卫生微生物学检验聽聽染色法、培养基和试剂聽
3聽聽设备和材料聽
3．1聽聽温箱：36±1℃。聽
3．2聽聽水浴：36±1℃。聽
3．3聽聽显微镜。聽
3．4聽聽离心机。聽
3．5聽聽试管架。聽
3．6聽聽灭菌平皿。聽
3．7聽聽灭菌小试管。聽
3．8聽聽载玻片。聽
3．9聽聽灭菌吸管：1聽mL、10聽mL。聽
3．10聽聽灭菌镊子。聽
3．11聽聽均质器。聽
3．12聽聽酒精灯。聽
3．13聽聽接种环。聽
4聽聽培养基和试剂聽
4．1聽聽葡萄糖肉浸液肉汤：按GB聽聽4789.28聽中聽4.1聽规定，在肉浸液肉汤内加入1%
葡萄糖。聽
4．2聽聽肉浸液肉汤：按聽GB聽4789.28聽中聽4.1聽规定。聽
4．3聽聽匹克氏肉汤：按聽GB聽4789.28聽中聽4.62聽规定。聽
4．4聽聽血琼脂平板：按聽GB聽4789.28聽中聽4.6聽规定。聽
4．5聽聽人血浆。聽
4．6聽聽0.25%氯化钙。聽
4．7聽聽灭菌生理盐水。聽
4．8聽聽杆菌肽药敏纸片（含聽0.04聽单位）聽。聽
5聽聽检验程序聽
6聽聽操作步骤聽
6．1聽聽样品处理聽
聽聽聽聽称取聽25聽g聽固体检样；称取聽25聽mL聽液体检样，加入聽225聽mL聽灭菌生理盐水，
研成匀浆制成混悬液。聽
6．2聽聽一般培养聽
聽聽聽聽将上述混悬液吸取聽5聽mL，接种于聽50聽mL聽葡萄糖肉浸液肉汤；或直接划线接
种于血平板，如检样污染严重，可同时按上述量接种匹克氏肉汤，经聽36±1℃培
养聽24聽h，挑起乙型溶血圆形突起的细小菌落，在血平板上分纯，然后观察溶血
情况及革兰氏染色，并进行链激酶试验及杆菌肽敏感试验。聽
6．3聽聽形态与染色聽
聽聽聽聽本菌呈球形或卵圆形，直径0.5～1聽聽碌m，链状排列，链长短不一，短者4～8
个细胞组成，长者聽20～30聽个，链的长短常与细菌的种类及生长环境有关；液体
培养中易呈长链；在固体培养基中常呈短链，不形成芽孢，无鞭毛，不能运动。聽聽
6．4聽聽培养特性聽
聽聽聽聽该菌营养要求较高，在普通培养基上生长不良，在加有血液、血清培养基中
生长较好。溶血性链球菌在血清肉汤中生长时管底呈絮状或颗粒状沉淀。血平板
上菌落为灰白色，半透明或不透明，表面光滑，有乳光，直径约0.5～0.75聽聽mm，
为圆形突起的细小菌落，乙型溶血链球菌周围有聽2～4聽聽mm聽界限分明、无色透明的
溶血圈。聽
6．5聽聽链激酶试验聽
致病性乙型溶血性链球菌能产生链激酶（即溶纤维蛋白酶）聽，此酶能激活正
常人体血液中的血浆蛋白酶原，使成血浆蛋白酶，而后溶解纤维蛋白。聽
吸取草酸钾血浆聽0.2聽聽mL，加0.8聽聽mL聽灭菌生理盐水，混匀，再加入聽18～24聽聽h36
±1℃培养的链球菌培养物聽0.5聽mL聽及聽0.25%氯化钙聽0.25聽mL（如氯化钙已潮解，
可适当加大至聽0.3%～0.35%）聽，振荡摇匀，置于聽36±1℃水浴中聽10聽min，血浆混
合物自行凝固（凝固程序至试管倒置，内容物不流动）聽。然后观察凝块重新完全
溶解的时间，完全溶解为阳性，如聽24聽h聽后不溶解即为阴性。聽
聽聽聽聽草酸钾人血浆配制：草酸钾0.01聽g聽放入灭菌小试管中，再加入5聽mL人血，
混匀，经离心沉淀，吸取上清液即为草酸钾人血浆。聽
6．6聽聽杆菌肽敏感试验聽
聽聽聽聽挑取乙型溶血性链球菌液，聽涂布于血平板上，聽用灭菌镊子夹取每片含有聽0.04
单位的杆菌肽纸片，放于上述平板上，于聽36±1℃培养聽18～24聽聽h，如有抑菌带出
现即为阳性。同时用已知阳性菌株作为对照。聽
聽聽聽聽附加说明：聽
本标准由卫生部卫生监督司提出。聽
本标准由北京市卫生防疫站负责起草。聽
本标准主要起草人刘以贤。聽
本标准由卫生部委托技术归口单位卫生部食品卫生监督检验所负责解释。聽聽聽聽
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