1聽聽主题内容与适用范围聽
本标准规定了食品中沙门氏菌的检验方法。聽
本标准适用于食品微生物学中毒样品中沙门氏菌的检验。聽
2聽聽引用标准聽
聽聽聽聽GB聽4789.28聽聽食品卫生微生物学检验聽聽染色法、培养基和试剂聽
3聽聽设备和材料聽
3．1聽聽天平：称取检样用。聽
3．2聽聽均质器或乳钵。聽
3．3聽聽温箱：36±1℃，42℃。聽
3．4聽聽显微镜。聽
3．5聽聽灭菌广口瓶：500聽mL。聽
3．6聽聽灭菌三角烧瓶：500聽mL，250聽mL。聽
3．7聽聽灭菌吸管：10聽mL。聽
3．8聽聽灭菌平皿：90聽mm×15聽mm。聽
3．9聽聽灭菌小试管：内径聽3聽mm，长聽5聽cm。聽
3．10聽聽灭菌毛细管。聽
3．11聽聽橡皮乳头。聽
3．12聽聽载玻片。聽
3．13聽聽酒精灯。聽
3．14聽聽灭菌金属匙或玻璃棒。聽
3．15聽聽接种棒、镍铬丝。聽
3．16聽聽试管架、试管篓。聽
4聽聽培养基和试剂聽
4．1聽聽缓冲蛋白胨水（BP）聽：按聽GB聽4789.28聽中聽4.12聽规定。聽
4．2聽聽氯化镁孔雀绿（MM）增菌液：按聽GB聽4789.28聽中聽4.13聽规定。聽
4．3聽聽四硫酸钠煌绿（TTB）增菌液：按聽GB聽4789.28聽中聽4.13聽规定。聽
4．4聽聽亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液：按聽GB聽4789.28聽中聽4.16聽规定。聽
4．5聽聽亚硫酸铋琼脂（BS）聽：按聽GB聽4789.28聽中聽4.19聽规定。聽
4．6聽聽DHL聽琼脂：按聽GB聽4789.28聽中聽4.20聽规定。聽
4．7聽聽HE聽琼脂：按聽GB聽4789.28聽中聽4.21聽规定。聽
4．8聽聽WS聽琼脂：按聽GB聽4789.28聽中聽4.23聽规定。聽
4．9聽聽SS聽琼脂：按聽GB聽4789.28聽中聽4.22聽规定。聽
4．10聽聽三糖铁琼脂：按聽GB聽4789.28聽中聽4.26，4.27聽规定。聽
4．11聽聽蛋白胨水、靛基质试剂：按聽GB聽4789.28聽中聽3.13聽规定。聽
4．12聽聽尿素琼脂（pH7.2）：按聽GB聽4789.28聽中聽3.15聽规定。聽
4．13聽聽氰化钾（KCN）培养基：按聽GB聽4789.28聽中聽3.16聽规定。聽
4．14聽聽氨基酸脱羧酶试验培养基：按聽GB聽4789.28聽中聽3.12聽规定。聽
4．15聽聽糖发酵管：按聽GB聽4789.28聽中聽3.2聽规定。聽
4．16聽聽ONPG聽培养基：按聽GB聽4789.28聽中聽3.3聽规定。聽
4．17聽聽半固体琼脂：按聽GB聽4789.28聽中聽4.30聽规定。聽
4．18聽聽丙二酸钠培养基：按聽GB聽4789.28聽中聽3.7聽规定。聽
4．19聽聽沙门氏菌因子血清：按26种用于初步分型；57种用于进一步分型；163
种用于详细分型。聽
5聽聽检验程序聽
聽聽聽聽沙门氏菌检验程序如下：聽
6聽聽操作步骤聽
6．1聽聽前增菌和增菌聽
冻肉、蛋品、乳品及其他加工食品均应经过前增菌。各称取检样聽25聽g，加
在装有聽225聽mL聽绘冲蛋白胨水的聽500聽mL聽广口瓶内。固体食品可先应用均质器以
8000～10000聽r/min聽打碎聽1聽min，或用乳钵加灭菌砂磨碎，粉状食品用灭菌匙或
玻棒研磨使乳化，于36±1℃培养4聽h（干蛋品培养18～24聽h）聽，移取聽10聽mL，转
种于聽100聽mL氯化镁孔雀绿增菌液或四硫酸钠煌绿增菌液内，于聽42℃培养聽18～24聽
h。同时，另取聽10聽mL，转种于聽100聽mL聽亚硒酸盐胱氨酸增菌液内，于聽36±1℃培
养聽18～24聽h。聽
鲜肉、聽鲜蛋、聽鲜乳或其他未经加工的食品不必经过前增菌。聽各取25聽g聽（25聽mL）
加入灭菌生理盐水聽25聽mL，按前法做成检样匀液；取种于聽100聽mL聽氯化镁孔雀绿
增菌液或四硫磺酸钠煌绿增菌液内，于42℃培养24聽h；另取25聽mL接种于聽100聽mL
亚硒酸盐胱增菌液内，于聽36±1℃培养聽18～24聽h。聽
6．2聽聽分离聽
取增菌液聽1聽环，划线接种于一个亚硫酸铋琼脂平板和一个聽EHL聽琼脂平板聽9
或HE琼脂平板、WS或SS琼脂平板）聽。两种增菌液可同时划线接种在同一个平板
上。于聽36±1℃分别培养聽18～24聽h（DHL、HE、WS、SS）或聽40～48聽h（BS）聽，观
察各个平板上生长的菌落，沙门氏菌Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ和沙门氏菌Ⅲ硌个平板
上的菌落特征见表聽1。聽
6．3聽聽生化试验聽
6．3．1聽聽自选择性琼脂平板上直接挑取数个可疑菌落，分别接种三糖铁琼脂。
在三糖铁琼脂。在三糖铁琼脂内，肠杆菌科常见属种的反应结果见表聽2。聽
聽聽聽聽表聽2聽说明在三糖铁琼脂内只有斜面产酸并同时硫化氢（H2S）阴性的菌株可
以排除，聽其他的反应结果均有沙门氏菌的可能，聽同时也均有不是沙门氏菌的可能。聽聽
6．3．2聽聽在接种三糖铁琼脂的同时，再接种蛋白胨水（供做靛基质试验）聽、悄素
琼脂（pH7.2）聽、氰化钾（KCN）培养基和赖氨酸脱羧酶试验培养基及对照培养基
各聽1聽管，于聽36±1℃培养聽18～24聽h，必要时可延长至聽48聽h，按表聽3聽判定结果。
按反应序号分类，沙门氏菌属的结果应属于A1、A2和B1，其他5种反应结果均
可以排除。聽
聽聽聽聽注：+表示阳性；-表示阴性。聽
6．4聽聽血清学分型鉴定聽
6．4．1聽聽抗原准备聽
一肌采用聽1.5%琼脂斜面培养物作为玻片凝集试验用的抗原。聽
O血清不凝集时，将菌株接种在琼脂量较高的（如2.5%～3%）培养基上再检
查；如果是由于聽Vi抗原的存在而阻止了O凝集反应时，可挑取菌苔于1聽mL生理
盐水中做成浓菌液，于酒精洒光焰上煮沸后再检查。H抗原发育不良时，将菌株
接种在聽0.7%～0.8%半固体琼脂平板的中央，俟菌落蔓延长生时，在其边缘部分
取菌检查；或将菌株通过装有0.3%～0.4%半固体琼脂的小玻管1～2次，自远端
取菌培养后再检查。聽
6．4．2聽聽O聽抗原的鉴定聽
用聽A～F聽多价聽O聽血清做玻片凝集试验，同时用生理盐水做对照。在生理盐水
中自凝者为粗糙形菌株，不能分型。聽
被A～F多价O聽血清液凝集者，依次用聽O4；O3、10；O7；O8；O9；O2聽和O11
因子血清做凝集试验。根据试验结果，判定聽O聽群。被聽O3、10聽血清凝集的菌株，
再用聽O10、O15、O34、O19单因子血清做凝集试验，判定E1、E2、E3、E4各亚群，
每一个O抗原成分的最后确定均应根据聽O单因子血清的检查结果，聽没有聽O聽单因子
血清的要用两个聽O聽复合因子血清进行核对。聽
不被聽A～F多价聽O血清凝集者，先用57种或163种沙门氏菌因子血清中的9
种多价O血清检查，如有其中一种血清凝集，则用这种血清所包括的O聽群血清逐
一检查，以确定聽O聽群。每种多价聽O聽血清所包括的聽O聽因子如下：聽
O聽多价聽1聽聽A、B，C，D，E，F聽群（并包括聽6，14聽群）聽
O聽多价聽2聽聽13，16，17，18，21聽群聽
O聽多价聽3聽聽28，30，35，38，39聽群聽
O聽多价聽4聽聽40，41，42，43聽群聽
O聽多价聽5聽聽44，45，47，48聽群聽
O聽多价聽6聽聽50，51，52，53聽群聽
O聽多价聽7聽聽55，56，57，58聽群聽
O聽多价聽8聽聽59，60，61，62聽群聽
O聽多价聽9聽聽63，65，66，67聽群聽
6．4．3聽聽H聽抗原的鉴定聽
属于聽A～F聽各聽O聽群的常见菌型，依次用表聽7聽所述聽H聽因子血清检查第聽1聽相和第聽
2聽相的聽H聽抗原
聽聽聽聽不常见的菌型，先用163种沙门氏菌因子血清中的8种多价H血清检查，如
有其中一种或两种血清凝集，聽则再用一种或两种血清所包括的各种H因子血清逐
一检查，以确定第1相和第聽2相的H聽抗原。8种多价H血清包括的H聽因子如下：聽
H聽多价聽1聽聽a,b,c,d,i聽
H聽多价聽2聽聽en,enx,enz15,fg,gms,gpu,gp,gq,mt,gz51聽
H聽多价聽3聽聽k,r,y,z,z10,1w,1z13,1z28,1z40聽
H聽多价聽4聽聽1，2；1，5；1，6；1，7；z6聽
H聽多价聽5聽聽z4z23,z4z24,z4z32,z29,z35,z36,z38聽
H聽多价聽6聽聽z39，z41，z42，z44聽
H聽多价聽7聽聽z52，z53，z54,z55聽
H聽多价聽8聽聽z56，z57，z60，z61，z62聽
每一个聽H聽抗原分成的最后确定均应根据聽H聽单因子血清的检查结果，没有聽H
单因子血清的要用两个聽H聽复合因子血清进行核对。聽
检出第1相H抗原而未检出第2相H抗原的或检出第2相H抗原而未检出第
1聽相聽H聽抗原的，可在琼脂斜面上移种聽1～2聽代后再检查。如仍只检出一个相的聽H
抗原，要用位相变异的方法检查其另一个相。单相菌不必做位相变异检查。聽
位相变异试验方法如下：聽
小玻管法：将半固体管（每管约1～2聽聽mL）在酒精灯上溶化并冷至50℃，取
已知相的聽H聽因子血清聽0.05～0.1聽mL，加入于溶化的半固体内，混匀后，用毛细
吸管吸取分装于供位相变异试验的小玻管内，俟凝固后，用接种针挑取待检菌，
接种于一端。将小玻管平放在平皿内，并在其旁放一团湿棉花，以防琼脂中水分
蒸发而干缩，每天检查结果，待另一相细菌解离后，可以从另一端挑取细菌进行
检查。培养基内血清的浓度应有适当的比例，过高时细菌不能生长，过低时同一
相细菌的动力不能抑制。一般按原血清聽1：200～1：800聽的量加入。聽
小倒管法：将两端开口的小玻管（下端开口要留一个缺口，不要平齐）放在
半固体管内，小玻管的上端应高出于培养基的表面，灭菌后备用。临用时在酒精
灯上加热溶化，冷至500℃，挑取因子血清1环，加入小套管中中的半固体内，
略加搅动，使其混匀，俟凝固后，将待检菌株接种于小套管中的半固体表层内，
每天检查结果，待另一相细菌解离后，可从套管外的半固体表面取菌检查，或转
种聽1%软琼脂斜面，于聽37℃培养后再做凝集试验。聽
简易平板法：将0.7%～0.8%半固体琼脂平板烘干表面水分，挑取因子血清聽1
环，滴在半固体平板表面，放置片刻，待血清吸收到琼脂内，在血清部位的中央
点种待检菌株，培养后，在形成蔓延生长的菌苔边缘取菌检查。聽
6．4．4聽聽Vi聽抗原的鉴定聽
聽聽聽聽用Vi因子血清检查。已知具有Vi抗原的菌型有：伤寒沙门氏菌，丙型副伤
寒沙门氏菌，都柏林沙门氏菌。聽
6．5聽聽菌型的判定和结果报告聽
综合以上生化试验和血清学分型鉴定的结果，聽按照表8或有关沙门氏菌属抗
原表判定菌型，并报告结果。聽
聽附加说明：聽
本标准由卫生部卫生监督司提出。聽
本标准由江西省卫生防疫站负责起草。聽
本标准主要起划人何晓青。聽
本标准由卫生部委托技术归口单位卫生部食品卫生监督检验所负责解释。聽聽聽
聽聽聽

聽

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