4、仪器和试剂
4．1聽 仪器
聽聽聽 实验室常用设备、低温高速离心机、低温冰箱(-80℃)或液氮罐、生物安全柜、恒温培养箱、恒温水
浴、灭菌设备、匀浆器等。
4．2试剂

4.2.1聽 营养肉汤培养基
聽聽聽聽聽聽 牛肉膏聽聽聽聽聽聽聽 2.5 g
聽聽聽聽聽聽 胰蛋白胨聽聽聽聽聽 5.0 g
聽聽聽聽聽聽 氯化钠聽聽聽聽聽聽聽 2.5 g
聽聽聽聽聽聽 磷酸氢二钾聽聽聽 1．3 g
聽聽聽 加蒸馏水至500 mL，加热溶解，调pH至7.4，分装后0.103 MPa灭菌20 min，4℃保存备用，保存
期不超过半年。

4.2.2 营养肉汤琼脂培养基
聽聽聽 琼脂粉聽聽聽 1.5 g
聽聽聽 加营养肉汤培养基至100 mL，加热融化后调节pH为7.4，0.103 MPa灭菌20 min。

4.2.3 底层培养基
4.2.3.1聽 配制方法
聽聽聽 在400mL灭菌的1.5％琼脂培养基(100℃)中依次加入磷酸盐贮备液8 mL，40％葡萄糖溶液
20mL，充分混匀，冷却至80℃左右时按每平皿25 mL(相对于90 mm平皿)制备平板，冷凝固化后倒
置于37℃培养箱中24 h，备用。

4.2.3.2聽 磷酸盐贮备液(Vogel—Bonner minimal medium E，50倍)
聽聽聽 磷酸氢钠铵聽聽聽聽聽聽 17．5 g
聽聽聽 柠檬酸聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 10．0 g
聽聽聽 磷酸氢二钾聽聽聽聽聽聽 50．0 g
聽聽聽 硫酸镁聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽 1．O g
聽聽聽 加蒸馏水至100 mL溶解，0.103 MPa灭菌20 min。
聽聽聽 注：待其他试剂完全溶解后冉将硫酸镁缓慢放人其中继续溶解，否则容易析出沉淀。
4.2.3.2聽 40％葡萄糖溶液
聽聽聽 葡萄糖40．0 g加蒸馏水至100 mI．，O．055 MPa灭菌20 min。
4.2.3.4聽 1.5％琼脂培养基
聽聽聽 琼脂粉6.0加入400 mL锥形瓶，加蒸馏水至400 mL，融化后，0.103 MPa灭菌20 min。
4.2.4 顶层培养基
聽聽聽 加热融化顶层琼脂，每100 mL顶层琼脂中加10 mL组氨酸生物素溶液(0.5 mmol／L)。混匀，分
装在4个烧瓶中，0.103 MPa灭菌20 min。用时融化分装小试管，每管2 mL，45℃水浴中保温。顶层
琼脂和组氨酸生物素溶液(0.5mmol／L)配制如下。
4.2.4.1 顶层琼脂
聽聽聽 琼脂粉3.0 g，氯化钠2.5g加蒸馏水至500 mI。，0.103 MPa灭菌20 min。

4.2.4.2 组氨酸一生物素溶液(0.5mmol／L)(诱变试验用)
聽聽聽 D-生物素(相对分子质量244)30．5 mg和L-组氨酸(相对分子质量155)19．4 mg加蒸馏水至
250 mL，0.103 MPa灭菌20 min。
4.2.5特殊试剂及培养基
4.2.5.1 0.8％氨苄青霉素溶液(鉴定菌株用，无菌配制)
聽聽聽 氨苄青霉素40 mg用氢氧化钠溶液(0.02 mo1／L)稀释至5 mL，保存4℃冰箱备用。
4.2.5.2 0.1％结晶紫溶液(鉴定菌株用)
聽聽聽 100 mg结晶紫，溶于无菌水至100 mL。
4.2.5.3 L-组氨酸溶液和D-生物素溶液(0.5mmol／L)(鉴定菌株用)
聽聽聽 L-组氨酸0.4043 g和D-生物素12．2 mg分别溶于蒸馏水至100 mL，0.103 MPa灭菌20 min，保存
于4℃冰箱备用。
4.2.5.4 0.8％四环素溶液(用于四环素抗性试验和氨苄青霉素四环素平板)
聽聽聽 40 mg四环素用盐酸缓冲液(0.02 mol／L)稀释至5 mL，保存于4℃冰箱。
4.2.5.5 氨苄青霉素平板(用作TA97、TA98、TAl00菌株的主平板)和氨苄青霉素四环素平板(用作
TAl02菌株的主平板)
聽聽聽 每1000 mL由以下成分组成：
聽聽聽 底层培养基聽聽聽 980 mL
聽聽聽 组氨酸水溶液(0.4043 g／100 mL)聽聽聽 10 mL
聽聽聽 生物素(0.5mmol／L)聽聽聽 6 mL
聽聽聽 0.8％氨苄青霉素溶液聽聽聽 3.15 mL
聽聽聽 0.8％四环素溶液聽聽聽 0.25 mL
聽聽聽 四环素仅在使用对四环素有抗性的TAl02时加入。各成分均已分别灭菌或无菌制备。
4.2.5.6组氨酸-生物素平板(组氨酸需要试验用)
聽聽聽 每1000 mL中由以下成分组成：
聽聽聽 底层培养基聽聽聽 984 mL
聽聽聽 组氨酸水溶液(0.4043 g／100 mL)聽 10 mL
聽聽聽 生物素(0.5 mmol／L)聽 6 mL
聽聽聽 各成分均已分别灭菌。
4.2.5.7二甲亚砜(DMSO)
聽聽聽 光谱纯，无菌。

聽

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