嗜热链球菌抑制法

原理：

聽聽检样经过聽80聽℃杀菌后，添加嗜热链球菌菌液。培养一段时间后，嗜热链球菌开始增殖。这时候加入代谢底物聽TTC，若该样品中不含有抗生素或抗生素的浓度低于检测限，嗜热链球菌将继续增殖，还原聽TTC聽成为红色物质。相反，如果样品中含有高于检测限的抑菌剂，则嗜热链球菌受到抑制，因此指示剂聽TTC聽不还原，保持原色。

检验程序：

聽聽活化菌种：取一接种环嗜热链球菌菌种，接种在聽9聽mL聽灭菌脱脂乳中，36聽℃±1聽℃培养聽12聽h～15h聽后，置聽2聽℃～5聽℃冰箱保存备用。每15聽d聽转种一次。

聽聽测试菌液：将经过活化的嗜热链球菌菌种接种灭菌脱脂乳，36聽℃±1聽℃培养聽15聽h±1聽h，加入相同体积的灭菌脱脂乳混匀稀释成为测试菌液。

聽聽培养操作：取检样聽9聽mL，置聽18聽mm×180聽mm聽试管内，每份检样另外做一份平行样。同时再作阴性和阳性对照各一份，阳性对照管用聽9聽mL聽青霉素聽G聽参照溶液，阴性对照管用灭菌脱脂乳聽9聽mL。所有装有样品的试管置聽80聽℃水浴加热聽5聽min，冷却至聽37聽℃以下，加入测试菌液1聽mL，轻轻旋转试管混匀。36聽℃±1聽℃水浴培养聽2聽h，加聽4％TTC聽水溶液聽0.3聽mL，在旋涡混匀器上混合聽15聽s聽或振动试管保证液体与样品混匀。36聽℃±1聽℃水浴避光培养聽30聽min，观察颜色变化。如果颜色没有变化，于水浴中继续避光培养聽30聽min聽作最终观察。观察时要迅速，避免光照过久出现干扰。

聽聽判断方法：在白色背景前观察，检样呈乳的原色时，指示乳中有抗生素存在，为阳性结果。检样呈红色为阴性结果。如最终观察现象仍为可疑，建议重新检测。

报告：

聽聽最终观察时，检样变为红色，报告为抗生素残留阴性。检样依然呈乳的原色，报告为抗生素残留阳性。

聽聽本方法检测几种常见抗生素的最低检出限为：青霉素0.004聽IU，链霉素聽0.5聽IU，庆大霉素聽0.4聽IU，卡那霉素聽5聽IU。

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