聽聽 本法系采用酶联免疫法测定大肠杆菌表达系统生产的重组制品中菌体蛋白质残留量。

聽聽聽试剂（1)包被液（P聽H9.6碳酸盐缓冲液）聽称取碳酸钠0.32g、碳酸氢钠0聽.5聽8聽6聽g聽,置200ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度。

聽聽聽(2聽)磷酸盐缓冲液（p聽H聽7聽.聽4聽)称取氯化钠8g、氯化钾0.2g、磷酸氢二钠1.44g、磷酸二氢钾0.24g，加水溶解并稀释至500ml,聽121°C灭菌15分钟。

聽聽聽(3聽)洗涤液（pH7.4)聽量取聚山梨酯20聽0.5ml，加磷酸盐缓冲液至500ml。

聽聽聽(4聽)稀释液（p聽H聽7聽.聽4聽)称取牛血清白蛋白0.5g，加洗涤液溶解并稀释至100ml。

聽聽聽(5聽)浓稀释液称取牛血清白蛋白l.O聽g聽,聽加洗涤液溶解并稀释至100ml。

聽聽聽(6聽)底物缓冲液（pH聽5聽.0枸橼酸-磷酸盐缓冲液）聽称取磷酸氢二钠（Na2HP04聽.聽12H20聽)1聽.聽84g、枸橼酸聽0.聽51g，加水溶解并稀释至100ml。

聽聽聽(7聽)底物液取邻苯二胺8mg、30%过氧化氢30^1，溶于底物缓冲液20ml中。临用时现配。

聽聽聽(8聽)终止液lm聽o聽l/L硫酸溶液。标准品溶液的制备按菌体蛋白质标准品说明书加水复溶，精密量取适量，用稀释液稀释成每lm聽l中含菌体蛋白质500ng、250ng、125ng、62.聽5ng、31.聽25ng、15.聽625ng,聽7.聽8125ng的溶液。

聽聽聽供试品溶液的制备聽取供试品适量，用稀释液稀释成每lml中约含250μg的溶液。如供试品每lml中含量小于500μg时，用浓稀释液稀释1倍。

聽聽聽测定法聽取兔抗大肠杆菌菌体蛋白质抗体适量，用包被液溶解并稀释成每lml中含10μg的溶液，以100μl/孔加至9聽6孔酶标板内，4℃放置过夜（16銆?8小时）。用洗涤液洗板3次；用洗涤液制备1%牛血清白蛋白溶液，以200μl/孔加至酶标板内，37℃放置2聽小时；将封闭好的酶标板用洗涤液洗板3聽次；以100μl/孔加人标准品溶液和供试品溶液，每个稀释度做双孔，同时加入2聽孔空白对照（稀释液），37°C放置2聽小时；用稀释液稀释辣根过氧化物酶（HRP)标记的兔抗大肠杆菌菌体蛋白质抗体1000倍，以100μl/聽孔加至酶标板内，37°C放置1聽小时，用洗涤液洗板1聽0次，以lOOμl/

孔加人底物液，3聽7聽℃避光放置4聽0聽分钟，以5聽0聽μl/孔加入终止液终止反应。用酶标仪在波长4聽9聽2聽n聽m聽处测定吸光度，应用计算机分析软件进行读数和数据分析，也可使用手工作图法计算。

聽聽聽以标准品溶液吸光度对其相应的浓度作标准曲线，并以供试品溶液吸光度在标准曲线上得到相应菌体蛋白质含量，

按以下公式计算：

聽聽聽供试品菌体蛋白质残留量（％)聽=聽（c×n）/（T×106）×100

式中聽聽c为供试品溶液中菌体蛋白质含量，ng/ml;

聽聽聽聽聽聽n为供试品稀释倍数；

聽聽聽聽聽聽T为供试品蛋白质含量，mg/ml。

注：也可采用经验证的酶联免疫试剂盒进行测定。

聽

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