1、修订说明

在2010年版的抑菌剂效力检查法指导原则基础上，并参照欧洲药典对抑菌及效力检查法的判断标准进行修订而成。

2、主要修订内容

2.1在概述部分增加抑菌剂的定义：抑菌剂是指抑制微生物生长的化学物质，有时也称防腐剂。

2.2培养基、培养基适用性检查、菌液制备

聽聽聽胰酪胨大豆肉汤培养基→胰酪大豆胨液体培养基

聽聽聽胰酪胨大豆琼脂培养基→胰酪大豆胨轻质培养基

聽聽聽培养时间：48/72h→不超过3天/不超过5天

聽聽聽pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液

2.3培养基适用性、方法的适用性试验中各试验菌的回收了按70%要求。

2.4产品分类及判断标准按EP进行修改，根据给药途径分为三类

2.5结果判断中的初始值定为所加菌数值（取消0时）

3、抑菌效力检查法的应用

聽聽聽采用微生物方法测定灭菌及非灭菌制剂的抑菌活性，已评价最终产品的抑菌效力。

3.1用于评价最终产品的抑菌效力

3.2用于指导生产企业在制剂研发阶段抑菌剂最低浓度的确定。

聽聽聽供试品和抑菌剂理化性质分析→抑菌剂配比浓度预实验→抑菌剂配比浓度证实试验

4、抑菌效力检查法在值机通则中的体现

聽聽聽在2015年版中国药典附录一制剂通则中相关的制剂项下“生产与贮存期间应符合如下规定”中增加“加入抑菌剂（防腐剂）的制剂，应符合抑菌剂（防腐剂）效力检查法的有关要求”

5、抑菌及效力检查实验

5.1培养基的适用性检查

聽聽聽A培养基

聽聽聽胰酪大豆胨液体

聽聽聽胰酪大豆胨琼脂

聽聽聽沙氏葡萄糖液体

聽聽聽沙氏葡萄糖琼脂

聽聽聽B试验用菌株

聽聽聽金黄色葡萄球菌

聽聽聽铜绿假单胞菌

聽聽聽大肠埃希菌

聽聽聽白色念珠菌

聽聽聽黑曲霉

聽聽聽C试验用菌株培养

聽聽聽培养基聽聽聽聽聽聽胰酪大豆胨琼脂/液体聽聽聽聽聽沙氏葡萄糖琼脂/液体

聽聽聽菌种聽聽聽聽聽聽聽聽金葡、大肠、铜绿聽聽聽聽聽聽聽聽白念、黑曲

聽聽聽培养条件聽聽聽聽18-24小时（30-35℃）聽聽聽聽白念：24-48h（20-25℃）聽

聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽聽黑曲霉：5-7天或直到获得丰富的孢子（20-25℃）

聽聽聽D菌液的制备及加菌量

聽聽聽聽聽分别用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9％无菌氯化钠溶液稀释至合适浓度

聽聽聽加菌量：不大于100cfu/皿

聽聽聽菌液放置：室温2小时：2-8℃24小时；黑曲霉孢子悬液--验证的贮存期内

聽聽聽E结果判断

聽聽聽比较所使用培养基与对照培养基计数/生长情况，70%为合格限度，≥70%，所用培养基合格。

5.2抑菌效力测定

A、菌种

聽聽聽同培养基适用性

B、菌液制备

聽聽聽同培养基适用性0.9%无菌氯化钠溶液

聽聽聽选择较浓菌液进行抑菌效力测定，一般106-108cfu/ml

C、供试品接种

聽聽聽将菌液分别接种入供试品中，混匀，置20-25℃避光贮存

注意：接种量：每1g或1ml样品接种105-106cfu

聽聽聽聽聽聽接种菌液体积不得超过供试品体积的1%（菌液100倍浓于最终的浓度）

聽聽聽聽聽聽尽量接种入原包装

聽聽聽聽聽聽接种菌液后，将样品充分混合

D、存活数测定

聽聽聽采用验证后的方法，按照各品种项下规定的时间取样，测定存活菌落数。计算1ml/1g供试品各试验菌所加菌数级间隔时间的菌数的1g值。

注意：方法适用性菌株同前（培养基适用性，与计数法不同）

聽聽聽聽聽聽方法适用性试验回收率要求同前（70%）

聽聽聽聽聽聽对照菌液平行制备

聽聽聽聽聽聽时间安排与控制

聽聽聽聽聽聽Lg值保留小数点后1位有效数字

E、结果判断

聽

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