1聽聽设备与材料

1.1聽低温冰箱：-70℃

1.2聽高压灭菌器。

1.3聽多孔玻璃珠（或素烧瓷珠）：直径2~3mm。

1.4聽商业化细胞冻存管（可选）。

2聽聽操作步骤

2.1聽将直径为2-3mm的瓷珠分装到小螺旋帽瓶中（每瓶最多装30粒）制成冷冻管，高压灭菌。

2.2聽标记冷冻管。

2.3聽在无菌状态下打开冷冻管。

2.4聽在所保藏菌种的最适营养条件下将细胞培养至稳定期或成熟期，进行纯度检查后，将菌株新鲜培养物加入到培养基中制成混悬液，无菌操作将混悬液转入到冷冻管中。

2.5聽封好冷冻管并颠倒四至五次乳化菌种培养基混悬液，切勿涡旋振荡。

2.6聽菌种吸附于瓷珠上后，将多余的混悬液吸出。

2.7聽也可使用商业化的细菌冻存管，此时应按照产品说明书进行操作。

3聽聽保藏

聽聽聽将冷冻管存于-70℃。

4聽聽保藏周期

聽聽聽可保存10年。

5聽聽聽恢复培养

5.1聽常用培养基参见附录G，在无菌条件下打开冷冻管，用无菌真或接种环取出一粒瓷珠，封好冷冻管并尽快将其送回低温条件下保存。

5.2聽菌种吧哦攒瓷珠可直接接种于固体培养基或适量的液体培养基中。

6聽聽注意事项

聽聽聽注意事项包括：

聽聽聽a聽为使菌种长期稳定保存，在冷冻管使用过程中要注意无菌操作。

聽聽聽b聽在生物安全柜中进行菌种保存和复苏等操作。

聽聽聽c聽在处理应用过的冷冻管时应注意生物安全。

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