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一、试验原理：
本培养基主要用于用于琼脂纸片扩散法（kirby-baner纸片扩散法）测定细菌对抗生素敏感性。聽牛肉粉和酸水解酪蛋白提供氮源、维生素和氨基酸；可溶性淀粉吸收有毒的代谢产物；琼脂是培养基的凝固剂。
二、培养基配方（g/L）：
|
牛肉粉 |
6.0 |
|
可溶性淀粉 |
1.5 |
|
酸水解酪蛋白 |
17.5 |
|
琼脂 |
17.0 |
|
pH 7.3±0.1 聽聽聽25℃ |
|
三、试验方法：
1.平板的制备与保存
称取Mueller-Hinton琼脂42.0g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，121℃高压灭菌15min，倾注培养基到无菌平皿中，使之在平皿中形成一个厚度为4-5 mm的琼脂层。倾注后将平板放到水平平面，使琼脂冷却凝固。凝固后的培养基应立即使用或存放于暗处和（或）5 ℃±3 ℃冰箱的密封袋中，在有效期内使用。使用前应可将平板置35 ℃温箱中或置室温层流橱中对琼脂表面进行干燥，培养基表面应湿润，但不能有水滴，培养皿也不应有水滴。聽
2. 质控菌株的复苏聽
将质控菌株接种到TSA平板上，按标准方法中规定的培养时间和温度进行培养。检查纯度合格后，用于质控工作菌悬液的制备。聽
3. 质控菌工作菌悬液的制备
将纯度满意的质控菌株培养物悬浮于TSB肉汤中，并调整浊度为0.5麦氏标准（约1×108聽CFU/mL～2×108聽CFU/mL）。聽
4. 接种聽
用涂布法将质控工作菌悬液接种于MH平板上，并贴上相应的抗生素纸片（每平板最多贴6片），将平板翻转后按标准方法中规定的培养时间和温度进行培养。调整菌悬液浊度与接种所有平板间的时间间隔不要超过15 min。聽
四、结果观察与解释聽
接种以下质控菌株，放置36±1℃需氧培养18-24小时。在无反射黑色背景下，观察有无抑菌环。
MH琼脂质控参考标准
|
抗生素名称 |
纸片抗生素 (mg) |
抑菌圈（mm） |
|||
|
大肠埃希菌 ATCC 25922 |
铜绿假单胞菌 ATCC 27853 |
金黄色葡萄球菌 ATCC 25923 |
粪肠球菌 ATCC 29212 |
||
|
庆大霉素 |
10 |
19-26 |
16-21 |
19-27 |
|
|
羟苄青霉素 |
100 |
23-29 |
18-24 |
- |
|
|
四环素 |
30 |
18-25 |
- |
24-30 |
|
|
多黏菌素B |
300IU |
12-16 |
11-16 |
- |
|
|
氯霉素 |
30 |
21-27 |
- |
19-26 |
|
|
TMP-SMZ |
1.25/23.75 |
24-32 |
- |
24-32 |
≥20 |
|
头孢哌酮 |
75 |
28-34 |
23-29 |
24-33 |
|
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注：本文属海博论坛论坛生物原创，未经允许不得转载。
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